การโคลนและการแสดงออกของยีนแอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนส II จาก Zymomonas mobilis ใน Rhodococcus opacus

Abstract

บทคัดย่อ                                                                                                                     

               ยีนที่เข้ารหัสแอลกฮอล์ดีไฮโดรจิเนส II  (adhB)  จาก  Zymomonas  mobilis   ได้ถูกโคลนเข้าสู่แบคทีเรีย Rhodococcus opacus ซึ่งเป็นสิ่งมีชีวิตเซลล์เดียวที่เป็นแหล่งของน้ำมัน การเตรียมเวคเตอร์สำหรับการแสดงออกของยีนทำโดยการแทรกโปรโมเตอร์ tac เข้าสู่ pNV18 ซึ่งเป็น shuttle plasmid ของ Nocardia-Escherichia coli จากการตรวจวัดแอกติวิตีของแอลกอฮฮล์ดีไฮโดรจีเนสในสารละลายเอนไซม์หยาบของรีคอมบิแนนต์ R. opacus โดยวิธีทางสเปกโทรโฟโทรเมทรีพบว่ามีค่าแอกติวิตีจำเพาะสูงกว่าที่มีรายงานใน Z. mobilis  ประมาณ 7 เท่า การย้อมสีแอกติวิตีช่วยยืนยันว่ามีแอลกอฮอล์   ดีไฮโดรจีเนสจาก  Z. mobilis  ในรีคอมบิแนนต์โคลน

Abstract

               Zymomonas mobilis  alcohol  dehydrogenase II gene  (adhB)  was  cloned  intoRhodococcus opacus PD630, a source of single cell oil. Expression vector was prepared by insertion of tac promoter into Nocardia-Escherichia coli shuttle plasmid pNV18. By spectrophotometric  assay,  crude extract  of  recombinant  R. opacus  possessed  alcohol dehydrogenase specific activity about 7 fold of that reported in Z. mobilis.  Activity staining also supported an existence of alcohol dehydrogenase from Z. mobilis in the recombinant clone.